把质粒转入细胞的方法步骤是什么啊

作者:本站编辑      投稿日期:2020-07-06
动物细胞----微显微注射
植物细胞----农杆菌
微生物------制备感受态(钙离子)
用个载体就可以进去了
比如病毒载体
至于你的补充,质粒只是一段DNA啊,怎么会很大呢。再说,细胞膜本来就是有通透性的,有物质进出(除非是破坏性的进出)是不会有影响的。当然细胞膜会选择性的进行物质的流动,这样也起到了保持胞内状态的功能。
使用载体的方法,比如病毒载体,就是利用病毒本身就具有穿透细胞膜的性质,将我们的质粒携带在病毒上。而脂质体的方法,则是将我们的质粒包裹在和细胞膜类似的无质粒(脂质体),这个东西会和细胞膜逐渐融合在一起,质粒就进入细胞了。属于两种不同的方法,相比而言,病毒的方法效率高,毒性小,但是需要实验室达到一定的安全级别。脂质体的方法简单易操作,但是转染效率低,细胞容易出现大量死亡
从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等。
在氢氧化钠(pH12.0-12.6碱性环境)和去污剂SDS的作用下,细菌蛋白质变性,细胞破裂,细菌染色体DNA变性,双链DNA氢键断裂,DNA双螺旋结构遭破坏而发生变形。
但由于质粒DNA相对分子质量较小,公价闭环的DNA虽然变性但仍处于拓扑缠绕状态,呈环状超螺旋结构,即使在高碱性pH条件下,两条互补链也不会完全分离。
将pH调至中性并有高盐存在的条件下,变性质粒DNA又恢复到原来的构型,而大部分染色体DNA和蛋白质难以复性,与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶性复合物。
通过离心沉淀,细胞破碎、染色体DNA及大部分蛋白质等可被出去,而质粒DNA及相对分子质量较小的RNA仍为可溶状态。混杂的RNA可用RNA酶消除,再用酚/氯仿处理,可除去残留蛋白质。在盐和乙醇存在的条件下,进一步离心沉淀质粒DNA。

扩展资料
分类:
根据质粒能否通过细菌的接合作用,可分为接合性质粒和非接合性质粒。接合性质粒带有与接合传递有关的基因。非接合质粒在一定条件下通过与其共存的接合质粒的诱动或转导而传递。
根据质粒在细菌内的复制类型可分为两类:严紧控制型和松弛控制型。严紧控制复制型质粒的复制酶系与染色体DNA复制共用,只能在细胞周期的一定阶段进行复制,当细胞染色体停止复制时,质粒也就不再复制。
松弛控制复制型的质粒的复制酶系不受染色体DNA复制酶系的影响,在整个细胞生长周期中随时都可以复制,在染色体复制已经停止时质粒仍能继续复制。
根据质粒的不相容性,可分为不相容性和相容性。不相容性指结构相似、密切相关的质粒不能稳定地共存于同一宿主细菌内的现象,反之为相容性。常用于流行病学的调查。
参考资料来源:百度百科-质粒抽提

先用相同的限制酶切割目的基因和质粒
得到相同的切口 (黏性末端和平末端)
然后就可以碱基互补配对 连接起来

然后 质粒可以导入一些细菌中 比如农杆菌导入植物细胞
或者直接显微注射进入受精卵(动物细胞)

也可以用钙离子处理细菌 是之变为感受态吸收周围外界分子
就可以吸收质粒进去 因为质粒是DNA
就可以在细胞内转录翻译表达出来
这样就产生了目的基因的蛋白质
于是就是发挥作用了

希望对你有帮助 不懂欢迎追问
不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可.质粒是带有抗性基因的,只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖,这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染,整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况,所以可以在提出质粒之后,取少量质粒送测序,来确保序列的无误.


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将重组质粒导入细菌的最常用方法是_ …… 用限制性核酸内切酶切割目的基因与ti农杆菌质粒 然后用dna连接酶连接目的基因与ti农杆菌质粒 把含目的基因的ti质粒转入农杆菌中 然后繁殖(含有目的基因的ti质粒的)农杆菌 然后利用(含有目的基因的ti质粒的)农杆菌侵染植物细胞的dna 然后就可以在植物细胞内翻译成蛋白质

质粒提取的主要步骤是什么及其作用 分子生物学 …… 如今提取质粒主要用的还是碱裂解法提取.http://www.360doc.com/content/14/1207/19/20843655_431108233.shtml原理可以进上面的链接看.操作步骤: 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质 粒.提取量受菌株、质粒...

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将重组质粒导入到大肠杆菌中的常用方法是什么?_ …… 用Ca2+溶液

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质粒的转换的方法有哪些?质粒转化后如何筛选?_ …… 转化的方法:最常用的是感受态法,包括热激和电转化等,转染不是转化,这是不同的概念.转化后,可以根据质粒上带有的某种特殊基因的表达来鉴定菌落,最常用的有:抗药性基因的表达,比如质粒带有氨苄抗性基因,能在AMP平板上长的一般可以初步判断为转化成功的菌;还有就是显色筛选,比如质粒上的LacZ基因表达,间接促使添加了X-gal的培养基变蓝,绿色荧光蛋白基因表达后菌落发荧光等.

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